流动相的脉冲 ?。玫氖褂煤臀ぷ⒁馐孪?/span>
为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作：
①防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相******在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜（0.2?m或0.45?m）等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。的滤器应经常清洗或更换。
②流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，***可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于液相色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
?、郾霉ぷ魇币粜姆乐谷芗疗磕诘牧鞫啾挥猛?，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，***终产生漏液。
?、艿墓ぷ餮沽霾灰娑ǖ?*****压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。
⑤流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵***无法正常工作。
如果产生故障，须查明原因，采取相应措施排除故障：
?、倜挥辛鞫嗔鞒?，又无压力指示。原因可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量（如5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密封环磨损，需更换。
?、谘沽土髁坎晃?。原因可能是气泡，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯馐?，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。
?、垩沽叩脑蚴枪苈繁欢氯?，需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。
．梯度洗脱
有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。
梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。
两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度***常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。
在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：
?、僖⒁馊芗恋幕ト苄裕幌嗷烊艿娜芗敛荒苡米魈荻认赐训牧鞫?。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后***不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。
②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以******良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在液相色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需******脱气，以防止混合时产生气泡。
?、刍旌先芗恋恼扯瘸Ｋ孀槌啥浠?，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过或液相色谱柱能承受的******压力。
?、苊看翁荻认赐阎蟊匦攵?span style="color:#333333;font-family:" font-size:14px;line-height:21px;background-color:#ffffff;white-space:normal;"="">液相色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经液相色谱柱，使固定相与初始流动相达到******平衡。 六通阀使用和维护注意事项：①样品溶液进样前必须用0.45?m滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的******压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通?？捎盟逑?，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。
柱的使用和维护注意事项
液相色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎***会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护液相色谱柱。 ?、佟”苊庋沽臀露鹊募本绫浠叭魏位嫡鸲Ｎ露鹊耐蝗槐浠蛘呤?span style="color:#333333;font-family:" font-size:14px;line-height:21px;background-color:#ffffff;white-space:normal;"="">液相色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。
② 应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。 ?、邸∫话闼道?span style="color:#333333;font-family:" font-size:14px;line-height:21px;background-color:#ffffff;white-space:normal;"="">液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
④ 选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。 ?、荨”苊饨矢丛拥难酚绕涫巧镅分苯幼⑷胫?，需要对样品进行预处理或者在进样器和液相色谱柱之间连接一?；ぶ?。?；ぶ话闶翘钣邢嗨乒潭ㄏ嗟亩讨１；ぶ梢远矣Ω镁８?。 ?、蕖【Ｓ们咳芗脸逑?span style="color:#333333;font-family:" font-size:14px;line-height:21px;background-color:#ffffff;white-space:normal;"="">液相色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。
?、摺”４?span style="color:#333333;font-family:" font-size:14px;line-height:21px;background-color:#ffffff;white-space:normal;"="">液相色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。******禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
?、唷?span style="color:#333333;font-family:" font-size:14px;line-height:21px;background-color:#ffffff;white-space:normal;"="">液相色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。
通常液相色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只能在pH2~9范围内使用。柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的液相色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。
每次工作完后，******用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素（氟、氯、溴）的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。
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